多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段
知識(shí)•巧學(xué)
一、PCR原理
1.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(又稱(chēng)PCR技術(shù))是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù),它能以極少量的DNA為模板,在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝。
2.用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí),DNA的復(fù)制過(guò)程與細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程類(lèi)似。
要點(diǎn)提示 DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械。為了明確表示DNA的方向,通常將DNA的羥基末端稱(chēng)為3′端,而磷酸基團(tuán)的末端稱(chēng)為5′端。DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA,而只能從引物的3′端延伸DNA鏈。
辨析比較 DNA聚合酶和DNA連接酶
(1)DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羥基上,形成磷酸二酯鍵;而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,不是在單個(gè)核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。
(2)DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板,將單個(gè)核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈;而DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來(lái)。因此DNA連接酶不需要模板。
3.在80~100 ℃范圍內(nèi),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體,雙鏈分開(kāi),這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為變性。當(dāng)溫度緩慢降低后,