知識(shí)•巧學(xué)
一、篩選菌株
1.PCR技術(shù)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù),PCR技術(shù)的原理是:如果DNA片段兩端的序列是已知的,那么采用PCR就可以很容易地將此DNA片段從整個(gè)DNA分子中擴(kuò)增出來。進(jìn)行PCR需要一段寡聚核苷酸鏈作為引物,它們各自與要擴(kuò)增的靶DNA片段末端互補(bǔ),引物與模板DNA相結(jié)合并沿模板DNA延伸,以擴(kuò)增靶DNA序列。PCR技術(shù)需要使用耐高溫的DNA聚合酶,這種酶要能夠忍受93 ℃左右的高溫。
深化升華 PCR的過程由三個(gè)基本反應(yīng)組成:(熱)變性、復(fù)性、延伸,這樣構(gòu)成一個(gè)循環(huán)的復(fù)制,新合成的DNA鏈又可以作為模板進(jìn)行下一輪復(fù)制,重復(fù)3步操作。DNA片段呈2的指數(shù)增長,在1~2小時(shí)內(nèi)可完成25~30次的循環(huán),擴(kuò)增的DNA片段數(shù)可增至106~107倍。
2.選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類的微生物生長,同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。
二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目
1.直接計(jì)數(shù)法
這種方法是指利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或者血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積樣品中微生物的數(shù)量。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片,上面有一個(gè)面積為1 mm2和高0.1 mm的計(jì)數(shù)室,該計(jì)數(shù)室又均分成400個(gè)小格。測(cè)量時(shí)將稀釋的樣品滴加在計(jì)數(shù)板上,蓋上蓋玻片,然后在顯微鏡下數(shù)出每個(gè)小格所含的細(xì)菌的平均數(shù),再按下面的公式求出每毫升樣品所含的細(xì)菌數(shù)。