1.獲得目的基因
(1)目的基因:人們所需要的基因。如:人的胰島素基因、植物的抗病基因等。
(2)獲取方法
①如果目的基因的序列是已知的,可用化學(xué)方法合成目的基因,或者用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增目的基因。
②如果目的基因的核苷酸序列是未知的,可以從基因文庫(kù)中獲取。
2.形成重組DNA分子
通常是用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA(如質(zhì)粒),使其產(chǎn)生相同的粘性末端,然后用DNA連接酶將兩者連接在一起,形成重組DNA分子。