類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的引物。PCR由高溫變性—低溫復(fù)性—中溫延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:
1.高溫變性:模板DNA經(jīng)加熱至95 ℃左右,一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解旋,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪循環(huán)作準(zhǔn)備。
2.低溫復(fù)性:模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55 ℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。
3.中溫延伸:DNA模板—引物結(jié)合物在耐高溫的DNA聚合酶的作用下,以四種脫氧核苷酸為原料,按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈,重復(fù)循環(huán)高溫變性—低溫復(fù)性—中溫延伸三個(gè)過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又成為下次循環(huán)的模板。